بیان توالی بهینه شده ژن زیرواحد اصلی فاکتور کلونیزاسیون i اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک (etec)

هدف: اشریشیا کولی انتروتوکسیژنیک به‏عنوان مهم‏ترین عامل اسهال و مرگ و میر در کودکان در کشورهای در حال توسعه شناخته شده است. این باکتری سالانه موجب مرگ 300 تا 500 هزار کودک زیر 5 سال می‏شود. به دلیل درمان مشکل و شیوع زیاد آن، طراحی یک واکسن مؤثر علیه این ارگانیسم از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین cfab به‏عنوان زیرواحد اصلی فیمبریه، نقش مهمی در اتصال باکتری به سلول‏های پوششی روده دارد و آنتی‏بادی‏های تولید شده علیه این پروتئین می‏تواند از اتصال باکتری به سطح بافت پوششی جلوگیری کند. از این رو این مولکول به تنهایی یا با سایر عوامل حدت‏زا در طراحی واکسن علیه این ارگانیسم مورد توجه بسیاری از محققین است. در این مطالعه، بیان فاکتور کلونیزاسیون b با هدف مطالعه ایمونوژنیسیته این پروتئین به‏عنوان جزئی از کاندیدای واکسن انجام شد. مواد و روش‏ها: ژن cfab با روش pcr، تکثیر و در ناقل pet28a همسانه‏سازی و بیان آن بررسی شد. با توجه به عدم بیان این ژن به‏علت وجود کدون‏های نادر، ژن cfab با استفاده از کدون‏های متداول در اشریشیا کولی بهینه‏سازی و مجدداً در ناقل pet28a همسانه‏سازی و بیان شد. نتایج: حضور باند 20 کیلودالتونی در ژل sds-page، بیان پروتئین cfab را نشان می‏داد که با روش ایمنو بلات با آنتی‏بادی anti-his tag و آنتی‏بادی ضد cfab، تأیید و با ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شد. نتیجه‏گیری: بهینه‏سازی کدون و بیان در میزبان‏های هترولوگ یک روش مفید در تولید پروتئین‏های نوترکیب به مقدار زیاد است.